Intron es un kit de extracción de ADN y de ARN que está diseñado para el aislamiento rápido y sensible de cualquiera de estas dos sustancias de una variedad de patógenos como virus, bacterias, etc.
Es un producto polivalente. De hecho, funciona con todo tipo de muestras. De ahí que podamos utilizarlo con plasma, con sangre fresca o congelada (tratada con anticoagulantes que no sean heparina), con suero, con otros fluidos corporales libres de células y células o tejidos que hayan sido infectados con patógenos.
Este kit de extracción de ADN y ARN está específicamente diseñado para aislar ácidos nucleicos de alta calidad de una variedad de patógenos y de muestras usando baja elución y volúmenes que permiten análisis sensibles aguas abajo.
Una vez que se haya empleado, el ARN o el ADN purificado están libres de proteínas y nucleasas, siendo así adecuado para su uso en aplicaciones posteriores que permiten detección de patógenos.
El kit de extracción de ADN o ARN utiliza la sal caotrópica en el tampón de lisis inactiva de inmediato DNasa o RNasa para garantizar el aislamiento de cualquiera de ellos intacto. Esto conlleva, además: una mayor eficiencia de la lisis (al no necesitar aditivos adicionales), realizar una extracción estable del ADN o del ARN de varias muestras patógenas; emplear un método sin fenol y sin necesidad de precipitación de EtOH, y poder tener en nuestro laboratorio la posibilidad de realizar adecuadamente la extracción de muestras en situaciones tan dispares como medicina forense o el diagnóstico de enfermedades, entre otras.
Para conseguir todo ello, este kit de extracción utiliza tecnología avanzada de membrana de gel de sílice que permite realizar una purificación rápida y efectiva de ADN o ARN sin extracción orgánica o precipitación con etanol.
Además, las condiciones de amortiguación se ajustan finamente para proporcionar una unión óptima del ADN o del ARN a la columna.
Protocolo del Kit de extracción de ADN y ARN
Las instrucciones de procedimiento del kit de extracción son muy simples; permitiendo que sus usuarios puedan purificar ADN o ARN de una gran variedad de fuentes objetivo en tan solo 30 minutos. De hecho, es el siguiente:
- Transferir 150 (300) μl de plasma, suero, orina, sobrenadante de cultivo celular, fluido libre de células o infección de virus en tejido o célula en el tubo de microcentrífuga de 1,5 ml.
Si el volumen de la muestra es inferior a 150 μl, la muestra debe ajustarse a 150 μl con agua tratada con DEPC. En caso de que el volumen de la muestra sea superior, debe utilizarse 15 ml. tubo centrífugo.
- Agregar 300 (600) μl de tampón de lisis. Si el volumen cambia, variar la cantidad.
- Mezclar agitando en vórtex durante 15 segundos.
- Incubar a temperatura ambiente (15-25 ° C) durante 10 minutos.
- Agregar 300 (600) μl de tampón de unión y mezclar agitando suavemente.
Si el volumen de la muestra es superior a 150 μl, debemos aumentar la cantidad de tampón de unión
- Colocar una columna giratoria en un tubo de recolección de 2 ml provisto.
- Cargar los lisados en la columna y centrifugar a 13,000 rpm durante 1 minuto.
- Desechar la solución en el tubo de recolección y colocar la columna nuevamente en los mismos 2 ml. tubo de recogida.
- Agregar 500 μl de tampón de lavado A, a la columna y centrifugue durante 1 minuto a 13,000 rpm.
- Desechar la solución en el tubo de recolección y colocar la columna de centrifugado nuevamente en los mismos 2 ml. tubo de recogida
- Agregar 500 μl de tampón de lavado B a la columna y centrifugar durante 1 minuto a 13,000 rpm.
- Desechar la solución en el tubo de recolección y colocar la columna de centrifugado nuevamente en los mismos 2 ml. tubo de recogida Centrifugar durante 1 minuto a 13,000 rpm. Es importante secar la membrana ya que el etanol residual puede interferir con reacciones aguas abajo.
- Colocar la columna en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml sin RNasa (no incluido), y añadir 30 – 60 μl de tampón de elución directamente sobre la membrana de la columna de centrifugado. Es importante secar la membrana ya que el etanol residual puede interferir con reacciones aguas abajo. No tocar la membrana con la punta de la pipeta.
- Incubar a temperatura ambiente durante 1 minuto, y luego centrifugar durante 1 minuto a 13,000 rpm.
- Utilizar 2-5 μl de solución eluida como plantilla para PCR o RT-PCR.
En caso de que estés interesado o interesada en adquirir este producto, contacta con nosotros, Durviz.